La etacridina bloquea el SARS-CoV-2 con un modo de acción distinto

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La enfermedad por coronavirus 2019 (COVID-19) es causada por el síndrome respiratorio agudo severo coronavirus 2 (SARS ‐ CoV ‐ 2), un nuevo virus de ARN que forma parte de la familia de los betacoronavirus. Emergiendo en Wuhan, China, a fines de 2019, el SARS ‐ CoV ‐ 2 se extendió por todo el mundo y se convirtió en una pandemia en toda regla que causó una morbilidad y mortalidad significativas en 190 países y territorios.

Los síntomas de la infección por SARS ‐ CoV ‐ 2 incluyen tos seca, fiebre y síntomas gastrointestinales en la mayoría de los pacientes, mientras que algunos experimentan una pérdida temporal del olfato y el gusto. Los pacientes con infección grave por SARS-CoV-2 pueden experimentar dificultad respiratoria aguda, malestar miocárdico, accidente cerebrovascular y daño multiorgánico durante las etapas finales.

Actualmente, la FDA ha aprobado remdesivir, un inhibidor de la replicación del SARS-CoV-2, para tratar el COVID-19, aunque la OMS informó recientemente que ofrece poco efecto protector contra el COVID-19.

Un fármaco seguro y potente que inhibe el SARS-CoV-2 incluso a concentraciones muy bajas

Ahora, investigadores de la Universidad de California, San Francisco y la Universidad de Stanford, California, EE. UU., Informaron sobre un antiséptico seguro y potente para su uso en humanos llamado etacridina, que inhibe eficazmente el SARS-CoV-2 incluso a concentraciones muy bajas de EC50 ~ 0.08 µM. Su trabajo se ha publicado en el servidor de preimpresión. bioRxiv*.

La etacridina se identificó mediante un cribado de alto rendimiento de una biblioteca de fármacos aprobada por la FDA en células vivas con la ayuda de un ensayo fluorescente. Con el fin de identificar fármacos que inhiben el virus SARS-CoV-2, los investigadores rediseñaron la proteína verde fluorescente (GFP) en un indicador de actividad de Mpro que se vuelve fluorescente en la escisión por el Mpro activo. Usando este ensayo fluorescente, identificaron muchos fármacos que inhiben la actividad de Mpro, y el más eficaz de ellos fue la etacridina, que inhibe la producción de SARS-CoV-2 mediante la inactivación de las partículas virales.

Diseño y demostración de un reportero de actividad basado en GFP de la proteasa principal Mpro del SARS-CoV2.  (a) Esquema del reportero.  (b) Secuencia del GFP10-11 invertido.  (c) Construcción del reportero FlipGFPMpro.  (d) Imágenes de fluorescencia (izquierda) y análisis cuantitativo (derecha) de SARS-CoV-2 o células HEK293T simuladas de infección que coexpresaron hACE2.  Las imágenes en el canal FlipGFP se iluminaron 30 veces en comparación con las de (e).  (e) Imágenes de fluorescencia de células HEK293T que expresan FlipGFPMpro y mCherry, junto con el mutante Mpro inactivo C145A (paneles superiores) o Mpro de tipo salvaje (paneles inferiores).  (f) Fluorescencia FlipGFP normalizada por mCherry.  La proporción de FlipGFP / mCherry para Mpro / C145A se normaliza a 1. Los datos son la media ± DE (n = 5).  FlipGFPTEV es un indicador de actividad de TEV que contiene la secuencia de escisión de TEV en FlipGFP.  Barra de escala: 5 μm (d);  10 μm (f).

Diseño y demostración de un reportero de actividad basado en GFP de la proteasa principal Mpro del SARS-CoV2. (a) Esquema del reportero. (b) Secuencia del GFP10-11 invertido. (c) Construcción del reportero FlipGFPMpro. (d) Imágenes de fluorescencia (izquierda) y análisis cuantitativo (derecha) de SARS-CoV-2 o células HEK293T simuladas de infección que coexpresaron hACE2. Las imágenes en el canal FlipGFP se iluminaron 30 veces en comparación con las de (e). (e) Imágenes de fluorescencia de células HEK293T que expresan FlipGFPMpro y mCherry, junto con el mutante Mpro inactivo C145A (paneles superiores) o Mpro de tipo salvaje (paneles inferiores). (f) Fluorescencia FlipGFP normalizada por mCherry. La proporción de FlipGFP / mCherry para Mpro / C145A se normaliza a 1. Los datos son la media ± DE (n = 5). FlipGFPTEV es un indicador de actividad de TEV que contiene la secuencia de escisión de TEV en FlipGFP. Barra de escala: 5 μm (d); 10 μm (f).

La etacridina bloquea el SARS-CoV-2 en líneas celulares humanas y no es citotóxica en modelos animales

Los hallazgos del estudio muestran un enfoque novedoso contra el SARS-CoV-2 que inactiva las partículas virales y la eficacia de Se espera que este enfoque sea independiente del tipo de célula. Se demostró que la etacridina bloquea el SARS-CoV-2 en células de la línea celular humana A549ACE2 y en células HNE primarias. Además, no fue tóxico en modelos animales, incluidos ratones, ratas y conejos.

Según los autores, la etacridina tiene una potencia antiviral más fuerte en comparación con el remdesivir y también tiene muy poca toxicidad celular. Otros medicamentos identificados por este estudio muestran un rango de CI50 similar en la inhibición de Mpro y EC50 contra el virus SARS-CoV-2. Sin embargo, la etacridina mostró una potencia antiviral mucho mayor de EC50 ~ 0.08 μM que la actividad inhibidora de Mpro (IC50 ~ 3.5 μM). Esto muestra que la acción principal de la etacridina no es inhibir Mpro.

“Nuestros hallazgos revelan un nuevo enfoque contra el SARS-CoV-2 mediante la inactivación de partículas virales, cuya eficacia se espera que sea independiente del tipo de célula”.

La etacridina inactiva las partículas virales sin afectar la replicación del virus.

Los autores afirman que su trabajo ha identificado un fármaco potente con un modo de acción claro contra el virus SARS-CoV-2, ya que la etacridina inactiva las partículas virales y, por lo tanto, evita la unión a las células huésped. El trabajo también proporciona evidencia directa de que las partículas de SARS-CoV-2 pierden su infectividad y capacidad para unirse a las células huésped después del tratamiento con etacridina. Además, los datos de qRT-PCR muestran que la etacridina no afecta la replicación del ARN viral. Por lo tanto, los resultados sugieren que la etacridina bloquea el virus SARS-CoV-2 principalmente inactivando las partículas virales sin afectar la replicación del virus. La investigación adicional se centró en los cambios ultraestructurales en las partículas virales y la unión de la etacridina en el ARN o la proteína viral para comprender cómo la etacridina inactiva el virus.

“Los mecanismos detallados de cómo la etacridina inactiva las partículas virales requerirán más investigación, como los posibles cambios ultraestructurales de las partículas virales y la unión de la etacridina al ARN o proteína viral”.

Actualmente, la etacridina se utiliza como desinfectante tópico, pero ya se ha utilizado para tratar a pacientes con sepsis puerperal mediante inyección intravenosa. Por lo tanto, su efecto antivírico se puede validar fácilmente en modelos animales, así como en pacientes con COVID-19. Además, dado que inactiva directamente las partículas del virus del SARS-CoV-2, la etacridina se puede combinar con fármacos como remdesivir, el inhibidor de la replicasa, para tratar a los pacientes con COVID-19 y mejorar su resultado clínico.

Si bien actualmente la etacridina se usa principalmente como desinfectante tópico de heridas, se ha aplicado a pacientes para tratar la sepsis puerperal mediante inyección intravenosa.. “

*Noticia importante

bioRxiv publica informes científicos preliminares que no son revisados ​​por pares y, por lo tanto, no deben considerarse concluyentes, guiar la práctica clínica / comportamiento relacionado con la salud o tratarse como información establecida.

Referencia de la revista:

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