La tecnología FluidFM de Cytosurge facilita la edición multiplex de CRISPR y el desarrollo de líneas celulares monoclonales en menos de tres semanas


En colaboración con el Hospital Infantil Universitario de Tübingen, los loci genómicos de varios genes se seleccionaron simultáneamente mediante una nanoinyección multiplexada de FluidFM en células CHO individuales, entregando directamente los complejos gRNA / Cas9 RNP en el núcleo.

Cytosurge, un proveedor global líder para manipulación de precisión de una sola celda, anunció hoy que su nano-sonda FluidFM, pionera y patentada, permitió la multiplexación CRISPR para generar múltiples líneas celulares Knock-Out monoclonales en menos de tres semanas a partir del día de la transfección hasta que se hayan caracterizado los clones.

Flujo de trabajo de desarrollo de líneas celulares FluidFM. El día 1, las células se transfectan mediante nanoinyección de FluidFM. El día 2, las células transfectadas con éxito se seleccionan y se aíslan mediante selección y colocación de FluidFM. Desde el día 3 al 14+, las células individuales aisladas se expanden en una línea celular monoclonal estable y se analiza su genoma.

La investigación farmacéutica y la fabricación de productos biológicos se basan en líneas celulares modificadas genéticamente con genes que han sido modificados para inducir el fenotipo deseado. En los procesos de desarrollo de líneas celulares convencionales, se evalúan varios candidatos dentro de un proceso iterativo para obtener líneas celulares monoclonales estables, un proceso que actualmente requiere de doce a catorce semanas. En comparación, al favorecer un enfoque “de abajo hacia arriba”, la tecnología FluidFM puede seleccionar una sola celda que ha modificado y generar un clon a partir de ella, en menos de tres semanas.

El University Children’s Hospital, Tübingen y Cytosurge generaron recientemente múltiples líneas celulares Knock-Out monoclonales utilizando la tecnología FluidFM. Los loci genómicos de varios genes se dirigieron simultáneamente mediante una nanoinyección de FluidFM multiplexada en células CHO, entregando directamente complejos gRNA / Cas9 RNP en el núcleo. Utilizando el mismo sistema, las células transfectadas con éxito se aislaron para una mayor expansión: más del 90% de las células aisladas se convirtieron en una colonia monoclonal estable. Lea la nota de aplicación.

“Catorce días después tEn la transfección, los clones se recogieron para su análisis mediante secuenciación de Sanger. En general, el 50% de los clones mostraron mutaciones en loci objetivo ”, dijo el Dr. Justin S Antony, Hospital de Niños de la Universidad de Tübingen. “Como demuestran estos datos, el enfoque ascendente de FluidFM reduce drásticamente el tiempo de procesamiento de las líneas celulares monoclonales con múltiples Knock-Out de meses a menos de tres semanas. A su vez, esta tecnología brinda la gran oportunidad de acelerar el proceso de producción de proteínas recombinantes y vacunas, lo que podría ser ventajoso para enfrentar pandemias como COVID-19 ”.

Los avances tecnológicos aportados por la tecnología FluidFM de Cytosurge en el campo de la ingeniería genética unicelular tienen el potencial de resolver algunos de los desafíos más exigentes a los que los científicos se enfrentan actualmente cuando necesitan desarrollar líneas celulares monoclonales de manera rápida y eficiente. Los métodos actuales son adecuados cuando se aplican a las líneas celulares y estrategias de ingeniería genética más comunes. Sin embargo, alcanzan rápidamente sus límites cuando se trata de tipos de células primarias poco comunes, raras o frágiles que también se sabe que son difíciles de transfectar, o cuando se necesita un diseño experimental complejo, por ejemplo, multiplexación CRISPR.

“Estos resultados muestran que se pueden administrar múltiples ARNg simultáneamente en células individuales seleccionadas mediante nanoinyección de FluidFM”, dijo el Dr. Paul Monnier, científico de aplicaciones de ciencias de la vida, Cytosurge. “Creemos que la multiplexación CRISPR con el método presentado se puede escalar para inyectar simultáneamente varias decenas de gRNA y que el enfoque ascendente de Cytosurge FluidFM acelerará significativamente los ciclos de desarrollo”.

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