¿Podrían los hisopos secos proporcionar un material más barato, seguro y rápido para las pruebas del SARS-CoV-2?


El alto costo social y económico de la pandemia de la enfermedad por coronavirus 2019 (COVID-19) ha llevado a mejorar las estrategias de prueba para el patógeno causante, el síndrome respiratorio agudo severo coronavirus 2 (SARS-CoV-2).

Un nuevo estudio, publicado como preimpresión en el bioRxiv* servidor, se ocupa de la viabilidad de utilizar muestras de hisopos secos para aislar el virus, en comparación con los hisopos húmedos, para reducir los costos y mejorar la seguridad.

Estudio: El método de recolección de muestras con hisopo seco para las pruebas de SARS-CoV2 se puede utilizar para cultivar virus.  Horth Rasur / Shutterstock

La necesidad del estudio

Actualmente, la mayoría de las pruebas de diagnóstico dependen de la reacción en cadena de la polimerasa cuantitativa con transcriptasa inversa (RT-qPCR) para detectar el ácido ribonucleico viral (ARN), realizada en muestras nasofaríngeas u orofaríngeas de pacientes. Sin embargo, este método es caro, puede tardar en producir resultados y tiene una tasa significativa de falsos negativos.

Estas desventajas han llevado a la exploración de técnicas alternativas para la detección de virus. Esto incluye modificaciones de la técnica de PCR, eliminando el medio de transporte, por ejemplo, o dejando fuera el paso de extracción de ARN.

Investigaciones anteriores han señalado que el umbral de ciclo (Ct) para las pruebas de PCR realizadas en hisopos secos, es decir, los incubados en condiciones secas, y los hisopos húmedos, incubados en medio húmedo. Esto también, con las modificaciones anteriores, ha planteado la posibilidad de reducir el tiempo de prueba y el gasto de prueba.

Los hisopos de las vías respiratorias superiores también se utilizan para detectar partículas virales infecciosas. Esto es importante porque la presencia de fragmentos genómicos virales o incluso el genoma completo no es un indicador de infectividad. Incluso semanas después de la eliminación del virus, el virus ácido nucleico todavía puede estar presente en los tejidos del huésped. Esta es la razón por la que el aislamiento del virus vivo y el cultivo exitoso es la única evidencia confiable, hasta ahora, de que el individuo es infeccioso en el momento de la prueba.

El cultivo viral requiere condiciones de laboratorio de bioseguridad III, muestras de alta calidad y requiere mucho tiempo. El costo de reactivos y el medio de cultivo también deben ser considerados. Sin embargo, este es el enfoque más cercano a una prueba estándar de oro de la infectividad del SARS-CoV-2 disponible hasta ahora.

Objetivo del estudio

El presente estudio tiene como objetivo explorar la viabilidad del SARS-CoV-2 para el cultivo de virus en muestras de hisopo seco. Se inocularon reservas virales de título conocido en inóculos específicos en hisopos, al igual que las muestras recogidas de los pacientes.

Los hisopos se agruparon en tres grupos para procesarlos por separado. El primero fue el grupo almacenado como hisopos secos; el segundo comprendía hisopos almacenados en medio de transporte de virus; y el último grupo contenía hisopos almacenados en solución tampón. Luego se incubaron a temperatura ambiente, 25 ° C, así como a 4 ° C.

La incubación se llevó a cabo durante 1, 4, 8, 12, 24, 48 y 72 horas, tras lo cual se mantuvieron todos a -80 ° C hasta el siguiente paso. Los hisopos con pinchos se utilizaron luego para infectar células Vero en cultivo.

A continuación, el medio se reemplazó por un medio nuevo. Las células Vero no infectadas actuaron como controles celulares, mientras que las células infectadas con una reserva de virus conocida se utilizaron como controles de infección, respectivamente.

Luego se llevó a cabo la extracción de ARN y el ARN se detectó usando RT-qPCR. Los genes detectados incluyeron el ORF 1ab y la nucleoproteína N.

¿Cuáles fueron los resultados?

Los hisopos en los tres grupos experimentales produjeron eluciones de virus que eran viables en grados similares tanto a temperatura ambiente como a 4ºC.oC. Los valores de Ct en todos los grupos fueron comparables, en otras palabras, tanto para el ORF 1ab como para el gen N.

Los valores de Ct oscilaron entre 16 y 19 después de hasta 12 horas, a ambas temperaturas, es decir, a 25ºC.oC y a las 4oC.

Los valores de Ct aumentaron lentamente después de 24 horas de almacenamiento, hasta 72 horas, hasta entre 24 y 36. Esto sugiere una disminución de la viabilidad viral con el tiempo, por lo que se recomienda recuperar las partículas virales de las muestras experimentales lo antes posible.

Sin embargo, los resultados también muestran que los valores de Ct son más bajos en aproximadamente 2 con el virus del grupo de hisopos de almacenamiento amortiguado, en comparación con los otros dos.

¿Cuáles son las implicaciones?

En el presente estudio, demostramos que pueden obtenerse y propagarse aislamientos virales viables a partir del método de recolección de muestras con hisopo seco.. ” El uso de hisopos secos facilita la toma de muestras de los pacientes y evita el uso de medios de transporte líquidos.

Estas características, además de la ausencia de necesidad de utilizar medios de transporte de virus y de extracción de ARN, hacen que el proceso de prueba sea más rápido, económico y seguro. Además, permitiría cultivar partículas de virus viables para diversos fines de investigación, ya que demuestra que tales partículas se pueden obtener después de incubar el hisopo seco a temperatura ambiente oa 4ºC.oC.

*Noticia importante

bioRxiv publica informes científicos preliminares que no son revisados ​​por pares y, por lo tanto, no deben considerarse concluyentes, guiar la práctica clínica / comportamiento relacionado con la salud o tratarse como información establecida.

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